Seroprevalence and seroconversion rates to SARS-CoV-2 in interns, residents, and medical doctors in a University Hospital in Bogotá, Colombia / Tasas de seroprevalencia y seroconversión al SARS-CoV-2 en internos, residentes y médicos en un Hospital Universitario de Bogotá, Colombia

Abstract Objectives: To determine the prevalence of antibodies to SARS-CoV-2 and the incidence of seroconversion in the first month of follow-up among interns, residents, and medical doctors attending patients at a University Hospital in Bogota (Colombia). Design or methods: A cross-sectional and a prospective study were performed during June, July, and August 2020 to assess seroprevalence and seroconversion rates using CLIA IgG for SARS-CoV-2. LFA IgG and IgM and ELFA IgM were also determined to explore concordance with CLIA IgG. Results: At baseline, 8 (2.28% 95%CI 1.16-4.43%) participants were IgG positive for SARS-CoV-2 by CLIA. At the end of the study, 21 (5.98% 95%CI 3.94-8.97%) individuals seroconverted by CLIA IgG. In all, 29 individuals had IgG by CLIA and of these 11 (3.13% 95%CI 1.76-5.52%) were asymptomatic. No associations with risk factors for infection were identified. CLIA IgG had moderate concordance (>962 samples) with LFA IgG and ELFA IgM, but minimal with LFA IgM. Conclusions: Our report is the first in Latina America on seroprevalence and seroconversion rates in medical healthcare workers. The relatively high rate (>3%) of asymptomatic health care workers with evidence of previous SARS-CoV-2 infection underscores the need to screen this population for infection to prevent infection/disease spread.

Resumen Objetivos: Determinar la prevalencia de anticuerpos frente al SARS-CoV-2 y la incidencia de seroconversión en el primer mes de seguimiento en internos, residentes y médicos que atienden pacientes en un Hospital Universitario de Bogotá (Colombia). Diseño y métodos: Se realizó un estudio transversal y prospectivo durante junio, julio y agosto de 2020 para evaluar las tasas de seroprevalencia y seroconversión utilizando CLIA IgG para SARS-CoV-2. También se determinaron LFA IgG e IgM y ELFA IgM para explorar la concordancia con CLIA IgG. Resultados: Al inicio del estudio, 8 (2,28% IC del 95% 1,16-4,43%) participantes fueron IgG positivos para SARS-CoV-2 por CLIA. Al final del estudio, 21 (5,98% IC 95% 3,94-8,97%) individuos seroconvirtieron por CLIA IgG. En total, 29 individuos tenían IgG por CLIA y de estos 11 (3,13% 95% IC 1,76-5,52%) eran asintomáticos. No se identificaron asociaciones con factores de riesgo de infección. El CLIA IgG tuvo una concordancia moderada (> 962 muestras) con LFA IgG y ELFA IgM, pero mínima con el LFA IgM. Conclusiones: Nuestro informe es el primero en América Latina sobre tasas de seroprevalencia y seroconversión en trabajadores médicos de la salud. La tasa relativamente alta (> 3%) de trabajadores de la salud asintomáticos con evidencia de infección previa por SARS-CoV-2 resalta la necesidad de realizar pruebas de detección de infección en esta población para prevenir la propagación de la infección.

Evaluación preliminar de la prueba comercial Chagas ( Trypanosoma cruzi ) IgG-ELISA ® en individuos colombianos / Preliminary evaluation of the commercial kit Chagas ( Trypanosoma cruzi ) IgG-ELISA ® in Colombian individuals

Introducción. El diagnóstico de la enfermedad de Chagas es fundamental para brindar un tratamiento oportuno y mejorar el pronóstico del paciente. La capacidad discriminatoria de las pruebas serológicas para el diagnóstico varía de acuerdo con la prevalencia de la enfermedad y el antígeno utilizado en la prueba. Objetivo. Evaluar la capacidad discriminatoria de la prueba comercial Chagas ( Trypanosoma cruzi ) IgG-ELISA ® (NovaTec Immunodiagnostica GmbH) en un grupo de individuos colombianos utilizando la prueba de inmunofluorescencia indirecta (IFI) y el ensayo de inmunoabsorción enzimática (ELISA) como referencia. Materiales y métodos. Se incluyeron 78 muestras de pacientes crónicos (36 asintomáticos y 42 sintomáticos) y 21 de controles sanos. También se analizaron 17 individuos no infectados con riesgo epidemiológico para la enfermedad de Chagas, siete con leishmaniasis y nueve con enfermedad cardiaca. Se evaluaron por PCR en tiempo real cuatro individuos cuyos resultados variaron entre pruebas. Resultados. Se encontraron diferencias significativas a una densidad óptica de 450 nm (p<0,0001) al comparar la mediana de la absorbancia entre los controles sanos (0,143) y los asintomáticos (2,401) o sintomáticos (2,776), entre los asintomáticos y sintomáticos (p=0,0408), entre los seronegativos con riesgo (0,232), individuos con enfermedades cardiacas (0,367) o con leishmaniasis (0,337) y los pacientes con enfermedad de Chagas (p<0,0001), y entre los controles sanos y los pacientes seronegativos con riesgo (p=0,0264), con enfermedades cardiacas (p=0,0015) o con leishmaniasis (p=0,002). La PCR en tiempo real fue positiva en tres de los cuatro casos. Conclusiones. Esta prueba comercial de ELISA permitió discriminar a los pacientes con Chagas de los controles. Se requieren estudios de fase II para determinar las características operativas de la prueba.

Introduction: The diagnosis of Chagas´ disease is essential to provide early treatment and improve patients´ prognosis . The discriminatory efficiency of the serological tests varies according to the disease prevalence and the test- antigen used . Objective: To evaluate the discriminatory efficiency of the commercial kit Chagas ( Trypanosoma cruzi ) IgG-ELISA ® (Nova Tec Immunodiagnostica GmbBH) in a group of Colombian individuals, using indirect immunofluorescence antibody testing (IFAT) and enzyme immunoassay (ELISA) tests as references. Materials and methods: Seventy-eight samples from chronic chagasic patients (36 asymptomatic and 42 symptomatic) and 21 healthy controls were included. Seventeen samples from non-infected people with Chagas´ disease epidemiological risk, seven with leishmaniasis and nine with non-chagasic cardiomyopathy were also analyzed. Real time PCR was performed on four individuals whose results differed among tests. Results: Significant differences at 450 nm optical absorbance were found (p<0.0001) when the median absorbance values of healthy controls (0.143), asymptomatic (2.401) and symptomatic (2.776) chagasic patients were compared, as well as when asymptomatic and symptomatic patients (p=0.0408) and seronegative people with epidemiological risk (0.232), cardiomyopathy (0.367) or leishmaniasis (0.337) were compared with chagasic patients (p<0.0001). Finally, there were differences among healthy controls and non-infected people with epidemiological risk (p=0.0264), patients with non-chagasic cardiomyopathy (p=0.0015) and patients with leishmaniasis (p=0.002). Real-time PCR was positive in three out of four analyzed cases. Conclusions: The commercial ELISA test allowed us to discriminate the chagasic patients from the controls. A phase II study of diagnostic tests for determining field reliability of this test is required.

Diseño de un panel multicolor para evaluar moléculas intracelulares y de superficie mediante citometría de flujo / Design of a multicolor panel to assess intracellular and surface molecules by flow cytometry

Introducción. La citometría de flujo permite detectar la presencia de moléculas intracelulares y de superficie, de forma simultánea sobre cada célula. Objetivo. Describir un método para la construcción armónica de un panel multicolor con 11 parámetros para el análisis fenotípico y funcional de linfocitos T (LT) CD8 + por citometría de flujo. Materiales y métodos. Para la construcción del panel multicolor, se seleccionaron las moléculas y se titularon los conjugados con fluorocromos para la determinación de CD3, CD8, CCR7, CD28, CD27, CD45RA, CD95 y CD127, en células mononucleares de sangre periférica. Para la evaluación del panel, se hizo la construcción progresiva adicionando uno a uno los conjugados y la fluorescencia menos uno (FMO). Este método fue aplicado para células ex vivo y para evaluar la producción de IFN ? , IL-2 y TNFa frente al estímulo con la enterotoxina B de Staphylococcus aureus (SEB) y al antígeno crudo de Trypanosoma cruzi . Finalmente, se procedió al análisis de las subpoblaciones de LT CD8 + ex vivo en individuos sanos. Resultados. La evaluación de las moléculas con los conjugados no mostró interferencia en las señales de fluorescencia. Las frecuencias de las subpoblaciones de LT CD8 + evaluadas fueron cercanas a los valores reportados en otros estudios. Además, se observó que la frecuencia de LT CD8 + productores de IFN ? , IL-2 y TNFa fue mayor a las seis horas de cultivo con SEB y con el antígeno crudo de T. cruzi . Conclusiones. El método aplicado para la construcción del panel multicolor permite obtener frecuencias de las subpoblaciones de LT CD8 + que corresponden a lo reportado en la literatura científica.

Introduction: Flow cytometry allows simultaneous detection of surface and intracellular molecules on each cell. Objective: To describe a method for building up a harmonic multicolor panel with 11 flow cytometry parameters for phenotypic and functional analysis on CD8 + T lymphocytes. Materials and methods: For the multicolor panel construction, we selected the molecules and titred conjugated antibodies with fluorochromes for CD3, CD8, CCR7, CD28, CD27, CD45RA, CD95 and CD127 determination in peripheral blood mononuclear cells (PBMC). To evaluate the panel, the conjugated antibodies were gradually added one by one and fluorescence minus one (FMO) test was performed. This method was applied to assess ex vivo subpopulations of T cells and the production of intracellular IFN ? , IL-2 and TNF a using polyclonal stimulation with enterotoxin B from Staphylococcus aureus (SEB) and antigen-specific cells with crude Trypanosoma cruzi antigen. Finally, the ex vivo CD8 + T lymphocyte subpopulations frequencies were analyzed in healthy individuals. Results: The evaluation of the selected molecules and conjugates did not show interference in the fluorescence signals and detection. The frequencies of CD8 + T cells evaluated were similar to the values reported in other studies. Additionally, we observed that the frequency of CD8 + T lymphocytes producing IFN ? , IL-2 and TNF a was higher 6 hours after culture with SEB and crude T. cruzi lysate. Conclusions: The method used for the construction of a multicolor panel allows obtaining frequencies of CD8 + T lymphocyte subpopulations corresponding to those reported in the literature.

A human astrocytoma cell line is highly susceptible to infection with Trypanosoma cruzi

Astrocytes play a vital role in neuronal protection, homeostasis, vascular interchange and the local immune response. Some viruses and parasites can cross the blood-brain barrier and infect glia. Trypanosoma cruzi, the aetiological agent of Chagas disease, can seriously compromise the central nervous system, mainly in immune-suppressed individuals, but also during the acute phase of the infection. In this report, the infective capacity of T. cruzi in a human astrocyte tumour-derived cell line was studied. Astrocytes exposed to trypomastigotes (1:10 ratio) produced intracellular amastigotes and new trypomastigotes emerged by day 4 post-infection (p.i.). At day 6 p.i., 93% of the cells were infected. Using flow cytometry, changes were observed in both the expression of major histocompatibility complex class I and II molecules and the chemokine secretion pattern of astrocytes exposed to the parasite. Blocking the low-density lipoprotein receptor on astrocytes did not reduce parasite intracellular infection. Thus, T. cruzi can infect astrocytes and modulate the immune response during central nervous system infection.

Expression of inhibitory receptors on CD4+ and CD8+ T cells from healthy Colombian donors / Expresión de receptores Inhibidores en linfocitos T CD4+ y CD8+ de donantes sanos Colombianos / Expressão de receptores inibitórios sobre linfócitos T CD4+ e CD8+ de doadores saudáveis Colombianos

T cell activation involves positive cellular signals that promote effector functions and negative signals that contribute to the regulation of these responses. These regulatory signals are generated upon activation of receptors on T cells that include CD160, 2B4, Programmed Death-1 and CTLA-4. Objective. To evaluate the expression of inhibitory receptors like CD160, 2B4, Programmed Death-1 and CTLA-4 on CD4+ and CD8+ T cells from healthy Colombian donors. Materials and methods. Peripheral blood mononuclear cells from 30 healthy donors from Bogotá (Colombia) were obtained via Ficoll-Hypaque density gradient and cells were stained with specific conjugated antibodies previously titrated. Results. The CD160, 2B4, and Programmed Death-1 inhibitory markers were detected on CD4+ T cells with expression levels of 0.35%, 1.04%, and 1.35%, respectively. On CD8+ T cells, these markers were expressed at higher levels: 16%, 8.97%, and 4.3%, respectively. In contrast to the other receptors, CTLA-4 frequency of expression showed no significant difference between CD4+ (1.56%) and CD8+ (1.53%) T cells. Frequency of CD160/2B4 and CTLA-4/ Programmed Death-1 coexpression was 0.18% and 0.09% on CD4+ cells, and 4.02% and 0.2% on CD8+ T cells. Conclusions. This is the first report showing the frequency of inhibitory receptors such as CD160, 2B4, Programmed Death-1, and CTLA-4 on CD4+ and CD8+ T cells from healthy Colombian donors. Our findings serve as a baseline for the analysis and comparison of these receptors in Colombian populations with different disease conditions.

La activación de células T involucra señales positivas que promueven funciones efectoras y señales negativas que contribuyen a la regulación de la respuesta inmune. Estas actividades regulatorias son generadas por la activación de receptores de las células T e incluyen moléculas como CD160, 2B4, PD-1 y CTLA-4. Objetivo. Evaluar la expresión de los receptores inhibitorios CD160, 2B4, PD-1 y CTLA-4 en células T CD4+ y CD8+ de donantes sanos colombianos. Materiales y métodos. Se obtuvieron células mononucleares de sangre periférica de 30 donantes sanos provenientes de Bogotá (Colombia) mediante gradiente de densidad por Ficoll-Hypaque, las células fueron marcadas con anticuerpos conjugados a fluorocromos previamente titulados. Resultados. CD160, 2B4, y PD-1 presentaron porcentajes de expresión en células T CD4+ de 0.35%, 1.04% y 1.35% respectivamente. En células T CD8+ estos receptores mostraron niveles de expresión más altos con porcentajes de 16.3%, 8.97% y 4.3% respectivamente. A diferencia de los otros receptores, CTLA-4 no mostró diferencias entre células T CD4+ (1.56%) y CD8+ (1.53%). Los porcentajes de co-expresión de CD160/2B4 y CTLA-4/PD-1 en células T CD4+ fueron de 0.18% y 0.09%, en células T CD8+ se observaron porcentajes de expresión de 4.02% y 0.2%. Conclusión. Este es el primer reporte que muestra la frecuencia de expresión de receptores inhibitorios tales como CD160, 2B4, PD-1 y CTLA-4 en células T CD4+ y CD8+ de donantes sanos colombianos. Estos hallazgos representan una línea de base para el análisis y la comparación de estos receptores en la población colombiana con diferentes enfermedades.

A ativação de células T envolve sinais positivos que promovem funções efetoras e sinais negativos que contribuem para a regulação da resposta imune. Estas atividades reguladoras são geradas através da ativação de receptores de células T e incluem moléculas tais como CD160, 2B4, PD-1 e CTLA-4. Objetivo. Avaliar a expressão de receptores inibitórios CD160 e 2B4, PD-1 e CTLA-4 em células T CD4+ e CD8+ de doadores saudáveis colombianos. Materiais e métodos. Foram obtidas células mononucleares do sangue periférico de 30 doadores saudáveis provenientes de Bogotá (Colômbia) a partir de gradiente de densidade por Ficoll-Hypaque, as células foram marcadas com anticorpos conjugados com fluorocromos previamente titulados. Resultados. CD160, 2B4, e PD-1 mostraram percentagens de expressão em células T CD4+ de 0,35%, 1,04% e 1,35%, respectivamente. Em células T CD8+ estes receptores mostraram níveis de expressão mais elevados com percentagens de 16,3%, 8,97% e 4,3% respectivamente. Ao contrário de outros receptores, CTLA-4 não apresentou diferenças entre células T CD4+ (1,56%) e CD8+ (1,53%). As percentagens de co-expressão de CD160/2B4 e CTLA-4/PD-1 em células T CD4+ foram de 0,18% e 0,09%; em células T CD8+ foram observadas percentagens de expressão de 4,02% e 0,2%. Conclusão. Este é o primeiro relatório que apresenta a frequência de expressão de receptores inibitórios tais como CD160, 2B4, PD-1 e CTLA-4 em células T CD4+ e CD8+ de doadores saudáveis colombianos. Estes resultados representam uma linha de base para análise e comparação desses receptores na população colombiana com diferentes doenças.

Expresión de IL-10, IL-4 e IFN- γ en lesiones activas de piel en niños con urticaria papular por picadura de pulga / Expression of IL-10, IL-4 and IFN-γ in active skin lesions of children with papular urticaria

Introducción. La urticaria papular por picadura de pulga se conoce como una enfermedad alérgica. Sin embargo, las investigaciones no muestran una clara relación con las enfermedades alérgicas. Objetivo. Estudiar la expresión de IL-10, IL-4 e IFN-γ, como marcadores de la respuesta efectora de células T en lesiones de piel de pacientes con urticaria papular por picadura de pulga. Materiales y métodos. Se incluyeron 14 biopsias de lesiones de piel de niños con diagnóstico de urticaria papular por picadura de pulga y 5 biopsias de piel sana obtenidas de niños sometidos a cirugía por enfermedades no inflamatorias. Todas las muestras se obtuvieron de niños menores de 12 años. Se extrajo ARN con trizol y se cuantificaron los niveles de expresión de las citocinas con la técnica de reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real. Resultados. En los pacientes con urticaria papular por picadura de pulga, se encontró amplia diversidad en los niveles de expresión de IFN-γ e IL-10, y valores bajos constantes para IL-4. Se observaron tres perfiles que no corresponden a un patrón común en los pacientes. Las muestras obtenidas de tejidos sanos no presentaron expresión de las citocinas. Conclusiones. Los datos corresponden a la primera descripción de citocinas que median la respuesta inmunitaria en el sitio de la lesión cutánea en niños con con urticaria papular por picadura de pulga, lo cual indica que la respuesta local es mixta ya que no se encuentra predominio de un fenotipo específico en ninguno de los pacientes.

Introduction: Papular urticaria caused by the bites of fleas traditionally has been defined as a chronic allergic disease. However, currently no clear relationship has been described between this pathology and common allergic diseases. Objective: The expression of IL-10, IL-4 and IFN-γ as markers of effector T cell responses was examined in skin lesions of patients with papular urticaria by flea bite. Materials and methods: Fourteen skin lesion biopsies were sampled from children with a clinical diagnosis of papular urticaria by flea bite and were compared with 5 healthy skin biopsies of children with no history of the disease. All children were under 12 years old. RNA was extracted with trizol and the expression levels of cytokines were analyzed by real time PCR technique. Results: A wide range in the expression levels of IFN-γ and IL-10 was noted as well as constant low values of IL-4. Three distinct profiles were observed, but which did not correspond to a recognizable pattern among the patients. The samples obtained from healthy tissues showed no expression of any of the cytokines. Conclusions: This is the first characterization of cytokines that mediate the immune response at the site of the skin lesion in children with papular urticaria by flea bite. The data indicated that the local response was mixed and that a single phenotype is not predominant among the patients.

Asociación de polimorfismos de la región promotora del gen de la interleucina 10 con la urticaria papular por picadura de pulga / Association of Interleukin 10 (IL-10) gene promoter region polymorphisms with flea bite papular urticaria

Objetivos. Establecer si los polimorfismos en la región promotora del gen de la IL-10 localizados en las posiciones -819 y -592 están asociados con la urticaria papular causada por la picadura de pulga, en pacientes pediátricos que asistieron a consulta de alergia o de dermatología a la Fundación Santa Fe de Bogotá, Colombia. Métodos. La frecuencia de estos dos polimorfismos en el ADN fue analizada en 25 niños con urticaria papular y 22 controles por medio de PCR (Polymerase Chain Reaction) y RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphisms). Resultados. No hubo diferencias significativas entre las frecuencias alélicas y genotípicas de cada polimorfismo individual o SNP (-819 o -592) entre pacientes y controles (p=0,21, OR=1,87, IC95% 0,79-4,40) cuando fueron calculados por la prueba exacta de Fisher. Conclusiones. Aunque en este trabajo preliminar no se encontró asociación de los polimorfismos reportados en otras poblaciones con la enfermedad alérgica, hay una tendencia en nuestros experimentos a encontrar un mayor número de haplotipos AT en pacientes que en controles Los resultados publicados por nuestro grupo de investigación, en cuanto a que la secreción de IL-10 in vitro se encuentra disminuida en pacientes con urticaria papular y no en controles sanos, indicar ían que la expresión genética de esta citocina estaría alterada en pacientes y, por consiguiente, esta condición estaría exacerbando la enfermedad. Los niveles disminuidos de esta citocina reguladora permitirían el desarrollo de condiciones hiperinmunes, como la alergia y la autoinmunidad...

Objectives: In this study we aimed to establish whether IL-10 promoter region genetic polymorphisms in positions -819 and -592 were associated with papular urticaria caused by flea bite in pediatric patients from the Fundación Santa Fe de Bogotá, Colombia.Methods: The frequency of these DNA polymorphisms was analyzed in 25 infants suffering papular urticaria and 22 healthy controls, after amplification of their corresponding DNA through polymerase chain reaction (PCR) and further analysis of resulting restriction fragment length polymorphisms (RFLP). Results: We found no significant differences in allelic and genotypic frequencies of either -819 or -592 SNPs between patients and healthy controls (p=0.21, OR=1.87, 95% IC=0.79-4.40). Conclusions: Although we did not find in this preliminary study a genetic association between papular urticaria and previously reported allergyassociated SNPs such as -819 and -592, we found higher numbers of allergy-associated AT haplotypes in patients than in controls. Previously published results from our group showed in vitro a diminished IL-10 secretion in patients and not in healthy controls. This finding, together with our present results, would indicate that the genetic expression of this cytokine could be altered in patients and that this condition could determine the exacerbation of papular urticaria. Low levels of this cytokine would allow for the development of hyperimmune conditions such as allergy and autoimmunity...

Células dendríticas y linfocitos T reguladores naturales en pacientes con enfermedad crónica de Chagas / Dendritic cells and natural regulatory T lymphocytes in chronic chagasic patients

Dada la cronicidad y persistencia del parásito Trypanosoma cruzi en la enfermedad de Chagas, el control homeostático de la respuesta inmunitaria para prevenir el daño tisular y limitar la duración del proceso inflamatorio involucra células con potencial regulador como las células dendríticas y los linfocitos T reguladores. Es por tal motivo que el objetivo de este estudio fue evaluar la proporción de células dendríticas totales, subpoblaciones de células dendríticas mieloides y plasmacitoides y los linfocitos T reguladores naturales en pacientes con enfermedad de Chagas y controles sanos. Las células mononucleares de sangre periférica de 18 pacientes con enfermedad crónica de Chagas y 16 controles sanos se sometieron a marcación para células dendríticas mieloides Lin- HLA-DR+ CD11c+, CD plasmacitoides Lin- HLA-DR+ CD123+ y linfocitos T reguladores naturales CD3+ CD4+ CD25+ Foxp3+ CD127 bajo. Las proporciones celulares se calcularon mediante el porcentaje obtenido por citometría de flujo. Se encontró que la proporción de células dendríticas plasmacitoides es menor que la de las mieloides, tanto en pacientes con enfermedad crónica de Chagas como en controles sanos, sin diferencias significativas entre ambos grupos. En contraste, se encontró una proporción significativamente mayor de linfocitos T reguladores naturales en los pacientes con enfermedad de Chagas al comparar con los controles sanos. En conclusión, la mayor proporción de linfocitos T reguladores naturales en pacientes con enfermedad crónica de Chagas sugiere que estas células pueden estar contribuyendo en la patogénesis de la enfermedad.

Given the chronicity and persistence of the parasite Trypanosoma cruzi in the Chagas disease victims, the homeostatic control of immune response to prevent tissue damage and limit the duration of the inflammatory process involves cells with regulatory potential as dendritic cells (DC) and regulatory T cells. For this reason, the objective of this study is to evaluate the proportion of total DC, myeloid and plasmacytoid DC subpopulations and natural regulatory T cells in chronic chagasic patients and healthy control subjects. Peripheral blood mononuclear cells (PBMC) from 18 chronic chagasic patients and 16 healthy control subjects were staining to myeloid DC Lin- HLA-DR+ CD11c+, plasmacytoid DC Lin-, HLA-DR+, CD123+ and natural regulatory T lymphocytes CD3+ CD4+ CD25+ Foxp3+ CD127low. Cellular proportions were calculated using the percentage obtained by flow cytometry. It was found that plasmacytoid CD proportion was lower than myeloid CD in both, chronic chagasic patients and healthy control subjects, without significant differences between the two groups. On the contrary, it was found that the proportion of natural regulatory T cells was significantly higher in chronic chagasic patients than in healthy control subjects upon comparing the two. These results suggest that the higher proportion of natural regulatory T cells in chronic chagasic patients might contribute to the disease pathogenesis.

Valores de referencia de células asesinas naturales (NK y NKT) en donantes de sangre de Bogotá / Reference values of the natural killer cells (NK and NKT) on blood donors in Bogota

Introducción: las células asesinas naturales (NK y NKT) son una población de linfocitos que circulan en bajos porcentajes en sangre periférica. Ambos tipos de células realizan un papel importante en la respuesta inmune en condiciones normales o en procesos patológicos como ciertos tumores,abortos espontáneos y en el rechazo a trasplantes, lo cual les confiere un gran interés clínico. Objetivo: el presente trabajo pretende establecer valores para las células NK y NKT por medio decitometría de flujo en una población adulta de donantes de un banco de sangre de Bogotá. Metodología: se recolectaron 104 muestras de donantes y se realizó un estudio con los marcadores CD3, CD16 y CD56.Resultados: de las muestras 47.2% fueron mujeres y 52.8% hombres. Para las mujeres el porcentajede células fue: NK 14.6% (μ 12.1) y NKT 3.0% (μ 2.5); para hombres NK 25.3% (μ 21.3) y NKT 3.5% (μ 2.9). Los valores absolutos de células para mujeres fueron NK 298.8 /µL (μ 253.9) y NKT 70.1 /µL (μ 47.7); para hombres NK 526.1 /µL (μ 448) y NKT 95.5 /µL (μ 77). Existe una diferencia estadística entre los valores absolutos par las células NK entre hombres y mujeres (p= 0.0004).

Introduction: the natural killer cells (NK y NKT) are a population of lymphocytes that circulate in the peripheral blood but in low percentages. Both types of cells play an important role in immuneresponse under normal conditions or in pathological processes as it is the case of certain tumors, spontaneous abortions and transplant rejections, what makes them very interesting from the clinical interest point of view.Objective: the aim of this work is to establish values for NK and NKT cells by means of flow cytometry in a group of adult population of blood donors in a blood bank in Bogotá. Methodology: 104 donor samples were collected and a study was carried out with CD3, CD56and CD16 markers. Results: 47.2% of the samples were women and 52.8% men. In the case of women the cellspercentage was: NK 14.6% (μ 12.1) and NKT 3.0% (μ 2.5); for men NK 25.3% (μ 21.3) and NKT 3.5% (μ 2.9). The absolute cells values for women were NK 298.8 /µL (μ 253.9) and NKT 70.1 /µL (μ 47.7); for men NK 526.1 /µL (μ 448) and NKT 95.5 /µL (μ 77). There is a statistical differencebetween the absolute values by the NK cells between men and women. (p= 0.0004).

Determinación fenotípica de subpoblaciones de células madre derivadas de sangre de cordón umbilical / Phenotypical determinants of stem cell subpopulations derived from human umbilical cord blood

Introducción. La sangre de cordón umbilical humana es una alternativa para la obtención de células madre hematopoyéticas; sin embargo, no es clara la expresión conjunta de los antígenos CD34, CD38 y HLA-DR, ni de antígenos embrionarios asociados con este tipo de muestra. Objetivos. Determinar la expresión en membrana de los antígenos CD34, CD38 y HLA-DR, así como de los antígenos embrionarios SSEA-4 (Specific Stage Embryonic Antigen–4) y CD13. Materiales y métodos. El estudio se realizó en muestras de sangre de cordón umbilical obtenidas de ochenta mujeres en estado de gravidez normal a término que asistieron al servicio de ginecobstetricia del Hospital Universitario San Ignacio. Los antígenos se determinaron mediante citometría de flujo. Resultados. El rango de células CD34+ presentes en sangre de cordón umbilical humana fue mayor al 0,2 por ciento (p=0,0010): a partir de esta población el rango de CD34+/ CD38-/ HLA-DR- fue de 0,0153 por ciento a 0,0234 por ciento, de CD34+/CD38+/HLA-DR- fue de 0,0191 por ciento a 0,296 por ciento, de CD34+/CD38-/HLA-DR+ fue de 0,0427 por ciento a 0,0676 por ciento, y de CD34+/CD38+/HLA-DR+ fue de 0,2427 por ciento a 0,5117 por ciento. La expresión de los antígenos embrionarios SSEA-4 y CD13 se determinó con el mismo método y se encontraron ocho muestras positivas para la expresión de estos antígenos. Conclusiones. El fenotipo que se expresa con mayor frecuencia en sangre de cordón umbilical corresponde a CD34+ CD38+ HLA DR+; además, el hallazgo de antígenos embrionarios podría indicar que en sangre de cordón umbilical humana existen poblaciones celulares con fenotipos similares a los progenitores celulares adultos multipotentes (Multipotent Adult Progenitor Cells) descritos en médula ósea.

Efecto del lipopolisacárido en cultivos de células dendríticas humanas y su inhibición por la polimixina B / Effect of lipopolysaccharides on human dentritic cell cultures and its inhibition by polymyxin B

Algunos estímulos de maduración utilizados en cultivos de células dendríticas, como las proteínas recombinantes obtenidas en sistemas bacterianos o los extractos proteicos de ectoparásitos, contienen lipopolisacáridos (LPS) y su presencia afecta el comportamiento de las células dendríticas en cultivo. En este trabajo se evaluó el efecto del LPS en un sistema de cultivo de células dendríticas humanas y la actividad de la polimixina B como inhibidor del efecto del LPS. Para esto, los monocitos obtenidos a partir de sangre periférica humana se diferenciaron a células dendríticas con IL-4 y GM-CSF y como estímulo de maduración se utilizó LPS o PGE2/FNT alfa. La expresión de marcadores y la secreción de citocinas se evaluaron por citometría de flujo. Los resultados mostraron que la preexposición a endotoxina disminuyó la expresión de CD83, inhibió la secreción de IL-12p70, FNT alfa e IL-10 y disminuyó la secreción de IL-6 en células dendríticas. Además...

Determinacion de valores de linfocitos TCD3+, CD3+/CD4+ y CD3+/CD8+ por citometria de flujo en adultos donantes de sangre del Hospital Universitario San Ignacio de Bogota / Determination of values of T-lymphocytes TCD3+, CD3+/CD4+ and CD3+/CD8+ for flow cytometry in donors blood adults of in Hospital Universitario San Ignacio, Bogota

Objetivo: determinar los valores de linfocitos T CD3+, CD3+/CD4+ y CD3+/CD8+ por citometría de flujo en una población adulta de donantes del Banco de Sangre del Hospital Universitario San Ignacio de Bogotá. Material y métodos: se seleccionaron 60 muestras de sangre periférica a las cuales se les analizó la población de leucocitos mediante los métodos de recuento manual total y diferencial, así como el recuento diferencial de linfocitos utilizando características morfológicas o la expresión de CD14 y CD45 por citometría de flujo. Las subpoblaciones de linfocitos fueron determinadas utilizando mareaje con tres fluorocromos para CD3, CD4 y CD8. Resultados: los porcentajes de linfocitos totales seleccionados mediante la expresión de CD45 o mediante el tamaño y la granularidad fueron similares. Los valores de linfocitos T CD3+ expresados en porcentaje presentaron un promedio de 64.9, con percentiles 5 y 95 de 50.1 - 79.4 y en valores absolutos (células/mi), el promedio fue 1358.8 células/mi, con percentiles de 743.7 - 2,259.8. Para los linfocitos TCD3+/ CD4+ en porcentaje el promedio fue de 33.8 con percentiles de 23.0 - 44.5, un promedio de 702 células con percentiles de 349.3 -1,256.3. Finalmente para los linfocitos T CD3+/CD8+ expresados en porcentaje el promedio fue 28.3 con percentiles 16.3 - 41.7 y un promedio de 555.6 células/ul con percentiles 225.7 y 1,011.2. Conclusiones: utilizando la metodología descrita en la que se combina sistemas automatizados y manuales, se demostró que los valores de linfocitos T son similares a los reportados a nivel nacional como internacional.